一、什么是ELISA試劑盒？其技術(shù)原理是什么？

酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）試劑盒是一種基于抗原-抗體特異性反應(yīng)與酶催化放大系統(tǒng)相結(jié)合的生物分析工具，用于對液體樣本中的目標(biāo)分子進(jìn)行定性與定量檢測。其核心技術(shù)原理在于：將酶標(biāo)記在特異性抗體或抗原上，形成酶標(biāo)復(fù)合物。該復(fù)合物既保留免疫反應(yīng)的特異性，又具備酶的生物催化活性。在反應(yīng)過程中，目標(biāo)分子與固相載體上包被的捕獲抗體結(jié)合，再通過酶標(biāo)抗體進(jìn)行識別，最終加入底物后通過酶促反應(yīng)產(chǎn)生顯色信號，實現(xiàn)對待測物的高靈敏度檢測。

ELISA技術(shù)自1971年由Engvall和Perlmann提出以來，因其操作簡便、靈敏度高、適合大批量樣本檢測等優(yōu)勢，已成為生命科學(xué)研究、臨床診斷、藥物開發(fā)和食品安全檢測等領(lǐng)域的重要分析手段。隨著國家科研投入的持續(xù)增加，ELISA試劑盒在高校、科研院所及醫(yī)療機(jī)構(gòu)中的應(yīng)用日益廣泛。

二、ELISA試劑盒有哪些核心優(yōu)勢？

1.廣泛的樣本適應(yīng)性
可檢測血清、血漿、尿液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等多種樣本類型，適用范圍涵蓋醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、農(nóng)業(yè)及環(huán)境監(jiān)測等多個領(lǐng)域。

2.高靈敏度與特異性
通過酶促放大作用，可檢測低至pg/mL級別的目標(biāo)分子，且由于抗原-抗體反應(yīng)的高度特異性，能夠有效區(qū)分結(jié)構(gòu)相似的分子。

3.操作簡便且成本可控
無需依賴昂貴的大型儀器，常規(guī)實驗室均可開展。試劑盒通常提供預(yù)包被板條和優(yōu)化好的試劑，流程標(biāo)準(zhǔn)化，適合高通量篩查。

4.結(jié)果穩(wěn)定重復(fù)性好
成熟的工藝控制和質(zhì)標(biāo)體系保證了試劑盒的批間一致性，板內(nèi)與板間變異系數(shù)通常可控制在15%以內(nèi)，滿足科研與診斷的重復(fù)性要求。

三、如何科學(xué)選擇適合的ELISA試劑盒？

1.明確檢測種屬與樣本類型
不同種屬（人、小鼠、大鼠等）的試劑盒通常不能通用。樣本類型（如血清vs血漿、細(xì)胞上清vs組織裂解液）也影響稀釋液選擇和前處理方式，需嚴(yán)格按說明書操作。

2.確認(rèn)檢測范圍與靈敏度
標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍應(yīng)覆蓋待測樣本的實際濃度。對于高濃度樣本，需進(jìn)行預(yù)實驗確定合適稀釋倍數(shù)；對低豐度目標(biāo)，應(yīng)選擇高靈敏度試劑盒（如HS系列）。

3.關(guān)注抗體對的特異性
優(yōu)選采用雙單克隆抗體設(shè)計的試劑盒，其特異性通常高于多抗-單抗組合。可通過說明書提供的交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)評估其特異性。

4.重視重復(fù)性與穩(wěn)定性指標(biāo)
重復(fù)性可通過板內(nèi)、板間變異系數(shù)（CV）評估，優(yōu)質(zhì)試劑盒的CV值應(yīng)低于15%。同時需注意試劑盒的有效期和儲存條件。

5.評估操作便捷性與時效性
對于大批量樣本，宜選擇反應(yīng)時間短、操作步驟簡化的型號。部分試劑盒還提供即用型試劑，進(jìn)一步提升實驗效率。

6.考察品牌美譽(yù)度與文獻(xiàn)支持
優(yōu)先選用品牌如斯達(dá)特生物（STARTER）等在產(chǎn)品質(zhì)控和技術(shù)支持方面更具保障。試劑盒是否有高質(zhì)量SCI文獻(xiàn)引用也是重要參考指標(biāo)。

四、ELISA實驗操作中有哪些關(guān)鍵注意事項？

1.樣本準(zhǔn)備與保存
使用新鮮樣本，避免溶血、細(xì)菌污染或反復(fù)凍融。短期保存（5天內(nèi)）可置于4℃，長期保存需-80℃分裝凍存。

2.試劑平衡與預(yù)處理
使用前將所有組分平衡至室溫（約30分鐘），避免溫度差異導(dǎo)致孔間反應(yīng)不均。不同批號試劑不得混用。

3.加樣操作規(guī)范
樣本需垂直加入孔底，避免觸碰孔壁。高通量檢測時應(yīng)分批次操作，確保加樣時間一致。每樣本更換吸頭以防交叉污染。

4.溫育與洗板控制
溫育時間和溫度應(yīng)嚴(yán)格按說明書設(shè)置。洗板時手工拍板需垂直用力，機(jī)器洗板應(yīng)定期檢查噴嘴通暢性，確保清洗充分。

5.顯色與終止時機(jī)
TMB底物顯色需避光反應(yīng)，終止液加入后應(yīng)在15分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。酶標(biāo)儀需預(yù)熱穩(wěn)定后再進(jìn)行檢測。

6.數(shù)據(jù)分析與質(zhì)控
標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)大于0.99。建議每板設(shè)置復(fù)孔、空白孔及質(zhì)控樣本，確保結(jié)果可靠性。

五、ELISA試劑盒的發(fā)展趨勢如何？

隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)和蛋白組學(xué)的發(fā)展，ELISA技術(shù)正向更高靈敏度、更廣檢測范圍和更佳多重檢測能力方向演進(jìn)。例如：

1.高靈敏度變體：如數(shù)字化ELISA（Simoa技術(shù)）將檢測靈敏度提升至fg/mL級別；

2.多重檢測試劑盒：通過微陣列或磁珠編碼實現(xiàn)單孔內(nèi)多指標(biāo)同步檢測；

3.自動化整合：與液體處理系統(tǒng)聯(lián)用，實現(xiàn)全流程標(biāo)準(zhǔn)化與高通量化；

4.應(yīng)用領(lǐng)域拓展：在細(xì)胞因子風(fēng)暴監(jiān)測、生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、藥物動力學(xué)研究中發(fā)揮更大作用。

結(jié)語

ELISA試劑盒作為經(jīng)典且成熟的免疫檢測工具，其選擇與使用的科學(xué)性直接關(guān)系到實驗數(shù)據(jù)的可靠性。科研工作者應(yīng)在明確檢測需求的基礎(chǔ)上，從試劑盒的原理、性能參數(shù)、品牌信譽(yù)和操作便利性等多維度進(jìn)行綜合評估。規(guī)范的實驗操作與嚴(yán)格的質(zhì)量控制，結(jié)合不斷優(yōu)化的產(chǎn)品技術(shù)，將推動ELISA在生命科學(xué)研究和臨床應(yīng)用中持續(xù)發(fā)揮重要作用。

產(chǎn)品信息

杭州斯達(dá)特志在為全球生命科學(xué)行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗體、蛋白、試劑盒等產(chǎn)品及研發(fā)服務(wù)。依托多個開發(fā)平臺：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開發(fā)平臺（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）,已正式通過歐盟98/79/EC認(rèn)證、ISO9001認(rèn)證、ISO13485。

如何科學(xué)選擇高質(zhì)量的ELISA試劑盒？